Vorteile und Nachteile der Western Blot

Western Blot, einen analytischen Technik verwendet werden, um ein spezifisches Protein in einer gegebenen Probe zu lokalisieren , verwendet die Fähigkeit eines Enzyms oder Fluoreszenz -markierten primären Antikörpers an sein spezifisches Antigen binden . Es ist ein Drei - Schritt-Verfahren , beginnend mit Gelelektrophorese , gefolgt von Blotting -Membran und Sondieren mit Antikörper. Protein Detektion kann direkt oder indirekt sein , wobei letztere mit Hilfe eines markierten gegen den primären Antikörper gerichtet Sekundär . Obwohl als Routineproteinanalyse-Technik angenommen wird, hat Western-Blot- Grenzen sowie Vorteile. Vorteil : Empfindlichkeit

Eines der größten Argumente für Western-Blot ist seine Empfindlichkeit. Aufgrund seiner Fähigkeit , um so wenig wie 0,1 ng Protein in einer Probe zu detektieren , kann die Technik theoretisch als eine wirksame frühe Diagnosewerkzeug dienen , Sensor die geringste immunogene Antwort von einem Virus oder Bakterium in einer Patientenprobe . Eine indirekte Westernblot weiter baut auf dieser Empfindlichkeit von der sekundären Antikörper Fähigkeit, die Intensität des von dem Abbildungssystem erfassten Signal zu verstärken . Größere Empfindlichkeit bedeutet, dass weniger Antikörper werden für die Prüfung, die nach unten Laborkosten erheblich senkt benötigt
. Vorteil: Spezifität

Die Western-Blot- Technik verdankt seine Spezifität an zwei großen beitrag Faktoren . Zunächst Gelelektrophorese sortiert eine Probe in Proteine ​​unterschiedlicher Größe , Ladung und Konformation . Dieser Vorgang an sich ist ein großer Schritt in Richtung Erkennung, als Banden im Gel gebildet geben bereits Hinweise auf die Größe des Proteins oder Polypeptid von Interesse. Die Spezifität der Antikörper-Antigen- Wechselwirkung dient als zweiter wichtiger Faktor . Da die spezifischen Antikörper zeigen Affinität für spezifische Proteine ​​, der Prozess kann selektiv ein Zielprotein auch in einem Gemisch von 300.000 verschiedene Proteine ​​nachzuweisen
. Nachteil: Neigt zu falscher oder Subjektive Ergebnisse