Basale Aktivität der SP6 Promoter

In -vitro-Experimenten sind diejenigen außerhalb eines lebenden Organismus in einem Reagenzglas oder ähnliche Umgebung durchgeführt . Wissenschaftler können RNA-Kopien oder Transkripte des Gens in vitro durch ein Verfahren der in vitro Transkription genannt machen . Das Enzym, das RNA-Transkript ermöglicht , basierend auf dem Gen wird als RNA-Polymerase. Ein solches Molekül ist die SP6 -Polymerase. Es erfordert ein DNA-Abschnitt genannt SP6-Promotor , um richtig zu funktionieren . Veranstalter

Ein Promotor ist die Region der DNA von einer RNA -Polymerase gebunden , um die Transkription zu initiieren. Die SP6 -Polymerase erfordert , dass eine sehr spezifische Sequenz im Promotor enthalten sein, um zu binden, so dass, wenn die SP6 -Polymerase ist für die in vitro-Transkription verwendet wird, muß das Gen, das den SP6- Promotor für die Transkription statt enthalten . Die SP6-Polymerase ist aus einer Art von Virus namens ein Bakteriophage ; Biotech-Firmen produzieren diese Polymerase durch Infektion mit Salmonellen -Bakterien Phagen und anschließender Isolierung der Polymerase .
Expression

Basale Expression oder Aktivität bezieht sich auf die Höhe der Expression in Abwesenheit von andere Moleküle, erhöhen oder verringern die Ebene der Transkription wird . Aktivatoren oder Repressoren , sind beispielsweise Proteine, die mit dem Promotor oder andere regulatorische Regionen Gen binden und entweder helfen bei der Rekrutierung der RNA -Polymerase oder verhindern, dass sie bindend. Induktoren sind Moleküle, die die Produktion des Genprodukts zu steigern , indem die Expressionsniveaus .
SP6

Basal -Aktivität für die SP6-Promotor wird in Abhängigkeit von den Bedingungen variieren Ihr Experiment . Die wichtigste Überlegung , natürlich, ist, wie Ihr experimentellen Bedingungen kann die Aktivität beeinflussen und wie SP6 im Vergleich zu anderen Systemen. Im Allgemeinen , SP6 -Polymerase und Promotoren liefern geringeren Wirkungsgrad als die T7 -oder T3- in vitro-Transkriptionssysteme, obwohl unter idealen Bedingungen SP6 ist in etwa vergleichbar mit diesen beiden anderen. Wie SP6 , T7 und T3 beide verwenden eine RNA-Polymerase aus dem Bakteriophagen .
AGB

Salzkonzentration und Temperatur sind zwei wichtige Faktoren bei der Bestimmung Grundaktivität . SP6 ist sehr empfindlich auf Salz -Konzentration , so dass höhere Salzkonzentrationen seine Aktivität stark ab . Alles andere gleich bleibt, ist die Expression signifikant höher bei 104 Grad Fahrenheit , als bei 99 Grad Fahrenheit. Nucleotid -Konzentration ist eine weitere wichtige Überlegung . Niedrige Konzentrationen kann möglicherweise zu Transkription vorzeitig zu beenden und damit verringern Sie Ihre Effizienz. Die Erhöhung der Nukleotid- Konzentration wird dieses Problem zu vermeiden . Wenn Sie die Synthese von RNA-Sonden jedoch die Zugabe von zu viel unmarkierten Nukleotid der Menge des markierten Nukleotid im Endprodukt zu verringern.