Wie man den pH-Wert des Zytoplasma Finden

Potenzial von Wasserstoff oder pH-Wert ist ein Maß für den sauren bzw. basischen Wirkung einer Flüssigkeit. Es ist in vielen Bereichen, wie Biologie , Chemie und Umweltwissenschaften wichtig. PH-Messung ist in den meisten Situationen einfach. Lackmuspapier in die Flüssigkeit eingeführt werden , und die Änderung der Farbe des Papiers bezeichnet den Grad, in dem das Fluid Säure oder Base. In Fällen, in denen die zu prüfende Flüssigkeit innerhalb einer Zelle , haben andere Methoden, um devised.Things Sie brauchen werden
2 ', 7' -Bis-( 2 = Carboxyethylacrylat ) -5 ( und -6 ) - Carboxyfluoreszein ( BCECF ) oder eine andere Substanz, die Fluoreszenz unter verschiedenen pH-Bedingungen
Fluoreszenz-Spektralphotometer mit Doppel Monochromatoren oder ein ähnliches Instrument für die Messung der Fluoreszenz
Zentrifuge
vorbestimmten Kalibrierungskorrelationsmesskurvenvon intrazellulären BCECF -und cytoplasmatische pH

anzeigen Weitere Anweisungen
1

kühlen Sie die Temperatur der Zelle Probe auf 41 bis 50 Grad Celsius. Dies ermöglicht eine bessere Absorptionsrate des fluoreszierenden Materials durch die Zellen .
2

Laden der Zellprobe mit einem Fluoreszenz induzierenden Substanz, wie BCECF . Dies wird durch Addieren der BCECF zum Zellmedium und dann Rühren der Mischung vorsichtig für 2,5 Stunden durchgeführt . Die BCECF wird durch die durchlässige Membran der Zellen absorbiert.
3

Trennen Sie die Zellen aus dem Medium und jede nicht absorbierte BCECF durch durch eine Zentrifuge läuft die Probe . Setzen Sie die Zellen in einen separaten Behälter .
4

der Zellprobe erhitzen auf 98,6 Grad Celsius für 30 Minuten, um die Bedingungen im menschlichen Körper zu nähern. Wenn die untersuchten Zellen in der Regel in einer anderen Umgebung zu leben als der menschliche Körper , passen Sie die Probe auf die entsprechende Temperatur .
5

der Zellprobe Excite durch Rühren . Dies hilft, die Fluoreszenzaktivität zu erhöhen.
6

Messen Fluoreszenzintensität der Zellprobe mit dem Spektralphotometer . Für beste Ergebnisse verwenden Anregungslicht bei Wellenlängen von 500 bis 510 Nanometern. Bei diesen Wellenlängen gibt es eine größere Verbreitung von Fluoreszenzintensität , so ist es leichter, die Ergebnisse unterscheiden. Die Fluoreszenzintensität in relativen Fluoreszenzeinheiten (RFU ), ein Verhältnis von der Helligkeit des Stoffes in einem angeregten , fluoreszierenden Zustand in seinen normalen , nicht angeregten Zustand gemessen. Je höher die RFU , desto heller der Stoff, die im Vergleich zu den normalen Zustand .
7

Vergleichen Spektralphotometer Ergebnisse vor, gezogen Eichkurven . Im allgemeinen bedeuten höhere Fluoreszenz höheren pH-Wert innerhalb der Probe. Mit einer Anregungswellenlänge von 510 nm , wäre eine Substanz mit einem pH-Wert von 6,4 ein RFU von etwa 20 zeigen , während eine Substanz mit einem pH-Wert von 9,9 würde eine RFU von etwa 55 zu zeigen.