Polymerisation Mechanismus in SDS -Gel

SDS-PAGE ist ein Verfahren, Wissenschaftler nutzen, um getrennte Proteine ​​auf, wie sie durch ein Gel wandern . Die Gele werden aus einem Polymer Polyacrylamid genannt . Wenn Sie ein Polyacrylamid-Gel machen, können Sie mit einer Mischung aus Chemikalien zu starten: Acrylamid, Bisacrylamid , SDS und einen Puffer , um den pH chemischen stabilisieren. Hinzufügen eines Persulfatverbindung und eine andere Chemikalie namens TEMED bewirkt, dass der Acrylamid zu langen Ketten zu bilden oder zu polymerisieren. Einleitung

Persulfation in Ammoniumpersulfat ist das Äquivalent von zwei Sulfationen durch einen schwachen Sauerstoff-Sauerstoff- Bindung verknüpft . Diese Bindung kann spalten oder brechen in zwei , was Sulfatradikale --- hochreaktive Moleküle mit einem ungepaarten Elektron . Der Sulfatrest kann mit Wasser reagieren, um ein Hydroxylradikal zu erzeugen , oder es kann mit dem Acrylamid-Monomer zu reagieren , um die Polymerisationsreaktion zu starten. TEMED wirkt wie ein Katalysator, der die Rate, mit der Persulfat -Ionen bilden Radikale beschleunigt .
Chain Reaction

Sobald eine Hydroxyl-oder Sulfatrest gebildet hat, ein Acrylamid -Monomer greift er , wobei eine der Elektronen in der Doppelbindung . Das Acrylamid-Monomer ist nun ein Rest mit einem ungepaarten Elektron , so geht es weiter , eine andere Acrylamid-Monomer in einer ähnlichen Art und Weise anzugreifen. Die Veranstaltungsreihe erzeugt eine schnell wachsende Kette von Acrylamid-Monomeren durch Einfachbindungen verknüpft . Die Kettenreaktion endet erst, wenn zwei Radikale miteinander reagieren .
Querverbindungen

Acrylamid auf eigene anwesend waren, nicht bilden würden das dicke Gel die Sie für die SDS-PAGE müssen . Die Polymere müssen vernetzt werden , um ein Gel mit den richtigen Eigenschaften zu bilden, und das ist, wo Bisacrylamid kommt in. Die Doppelbindungen in Bisacrylamid dienen auch als Ziel für die Radikalen in der Reaktion , und weil es zwei Stellen, an denen es sein kann durch Radikale angegriffen , es schließlich in zwei der wachsenden Polymere eingebaut . Folglich sind die Polymere am Ende mit Vernetzungen zwischen ihnen an zufälligen Stellen entlang der Länge jeder Kette .
Überlegungen

Die Polymerisation ist sehr schnell , so, wenn Sie " ve fügte der TEMED und Ammoniumpersulfat , wird es sehr schnell erfolgen . Die Reinheit der Reagenzien Ihr ist wichtig, weil Verunreinigungen können Ihre Ergebnisse beeinflussen. Acrylsäure , zum Beispiel , können dem Polymer zugesetzt werden und erzeugt Ionenaustauschstellen , die lokale pH-Schwankungen in Ihrem Gel verursachen könnten. Das resultierende Gel können noch einige Acrylamid-Monomer und Acrylamid ist ein Nervengift , so stets entsprechende Vorkehrungen bei der Arbeit mit SDS -Gele.