Wie DNA aus Pflanzenblätter -Extrakt

Pflanzen organischen Substanz besteht aus vielen Zellen , die jeweils enthalten die DNA , die die Anweisungen für Wachstum und Funktion hält gemacht . Wissenschaftler ggf. einen Teil oder alle der in den Zellen der genetischen vorliegenden Material zu studieren, und so müssen sicher extrahieren die DNA aus der Strukturmaterial und Zellmaschinerie , die it.Things umgibt Sie brauchen
2 Gramm blättern und Stößel und Mörser
Zentrifuge
Wasserbad
Gleichgewicht
Cheesecloth
Sechs 15ml Zentrifugenröhrchen
Eine 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen
100ml CTAB -Extraktionspuffer und
2 ml Beta -Mercaptoethanol
7 ml 24: 1 Chloroform: Isoamylalkohol Mischung
50 Mikroliter der RNase A in einer Konzentration von 10 mg /ml
Pipetten
6 ml Isopropanol
70% Ethanol
Sterile VE-Wasser
1 ml 2 ml
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Füllen Sie den Wasserbad auf die empfohlene Ebene mit Wasser, das mit der einzelnen Herstellerangaben variiert , und schalten Sie ihn ein . Stellen Sie den Wasserbad auf 65 Grad Celsius und lassen es kommen bis zu der Temperatur. Legen Sie den Behälter Isopropanol auf Eis. Stellen Sie die Zentrifuge bei 3.000 Umdrehungen pro Minute bei einer Temperatur von 20 Grad Celsius.
2

2 g abwiegen lässt auf eine Waage und legen Sie sie in einen Mörser . So ist eine ausreichende Beta -Mercaptoethanol über eine Pipette in einen Behälter mit Extraktionspuffer so das Endprodukt wird von ein bis zwei Prozent der beta -Mercaptoethanol hergestellt . Zum Beispiel, wenn Sie ein Volumen von etwa 100 ml Puffer, der misst , dann 2 ml beta- Mercaptoethanol in den Behälter geben und gut mischen .
3

Pipette 7 ml Extraktionspuffer in den Mörtel . Crush die Mischung in eine homogene Flüssigkeit mit dem Stößel.
4

Falten Sie ein Stück Gaze über vier Schichten zu bilden. Belastung und drücken Sie die Flüssigkeit durch die Schichten in einen 15 - ml-Zentrifugenröhrchen .
5

Das Röhrchen wird in ein Wasserbad für 30to 60 min nuten . Schwenken Sie die Röhre , um den Inhalt von einer Stunde mischen jedes Quartal . Lassen Sie das Rohr bis auf Raumtemperatur abkühlen , nachdem die volle Zeit ist um.
6

Top bis das Rohr mit der Chloroform und Isoamylalkohol -Gemisch ( diese enthält 24 Teile Chloroform zu einem Teil Isoamylalkohol ) , so dass die Tube enthält etwa die Hälfte der Probe und die Hälfte der neuen Flüssigkeitszugabe . Das Röhrchen und drehen Sie ihn ein paar Mal langsam , so dass die Flüssigkeit mischt .
7

Setzen Sie das Rohr in der Zentrifuge und lassen Sie es für 10 Minuten zu drehen.
8

Man gibt 50 ml RNAse A in ein neues Zentrifugenröhrchen . Pipettieren den Überstand ( die klare Schicht an der Spitze der Röhre über einer weißen Schicht von Schutt ) in der ersten Röhre aus und verschieben Sie sie in der zweiten Röhre . Das Röhrchen und schwenken es ein paar Mal , um die Inhalte zusammen zu mischen. Halten Sie das Rohr bei Raumtemperatur für eine Stunde.
9

Führen Sie die Schritte 6 und 7 wieder zweimal , so dass Sie eine klare Probenröhrchen haben . Pipettieren bis zu 9 ml der klaren Flüssigkeit aus dem letzten Rohr in ein neues Röhrchen . 6 ml Isopropanol und 10-mal Kehren Sie die Rohre in eine sanfte Art und Weise , so dass die DNA fällt aus der Lösung aus und in eine feste Form . Dann Zentrifugieren Sie die Röhrchen 10 Minuten lang , die ein Pellet der DNA im Boden des Röhrchens zu erstellen sollte .
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Gießen Sie die Flüssigkeit in der Röhre , so dass die Pellets bleibt . Pipette in 2 ml 70% Ethanol und Platz zurück in der Zentrifuge für fünf Minuten. Gießen Sie den flüssigen Teil wieder . Verwenden Sie eine sterile Pipettenspitze zu holen die Pellets und verschieben Sie sie in einer sterilen 1,5 -ml- Eppendorf-Röhrchen . Pipette in 200 Mikroliter sterilem deionisiertem Wasser und lassen die DNA vollständig lösen sich in der Flüssigkeit, die über Nacht erfolgen. Die Probe wird dann zur Analyse bereit .