Wie Antikörperkonzentration Berechnen

Eine der gängigsten Methoden zur Berechnung einer Proteinkonzentration in einer Laborumgebung ist es, ein Bradford-Test verwenden . Das Bradford-Reagenz ist eine farbmetrische Reagens, das die Farbe ändert , basierend auf Proteinkonzentration . Durch die Kombination einer bekannten Standardkurve mit der Bradford-Reagenz , können Sie eine Maßnahme , gegen die Sie die Konzentration eines Proteins berechnen , einschließlich antibodies.Things Sie und
gereinigte Antikörper Brauchen Sie in einem bekannten Puffer
Buffer passend zum erstellen Aussetzung des Antikörpers
Lyophilized Rinderserumalbumin (BSA )
Microcentrifge Rohre
Labor Stift
Vortexer
Labormaßstab
Wägepapier
1 ml -Pipette
Bradford-Reagenz
Multi -Well-Platte
Farbmetrik -Plattenlesegerät
Microsoft Excel
Lab Buch
Pen
anzeigen Weitere Anweisungen
einen Standard zu schaffen
1

messen 200 mg BSA auf Wiegepapier mit einem Labormaßstab. Setzen Sie ihn in ein Mikrozentrifugenröhrchen . 2 ml Puffer in die Mikrozentrifugenröhrchen , welche die 200 mg BSA . Beschriften Sie diese Röhre " 1."
2

Vortex Tube 1 bis BSA vollständig gelöst ist.
3

Entfernen 500 ul der BSA in Puffer und Transfer einem zweiten Rohr . Beschriften Sie diese Röhre "2." Fügen Sie 500 ul von einfachen Puffer zur U 2.
4

Entfernen 200 ul BSA in Puffer von der U 1 und überträgt es auf ein neues Röhrchen . Beschriften Sie diese Röhre "3." Fügen Sie 800 ul Normalpufferder U 3.
5

Entfernen 100 ul BSA in Puffer von der U 1 und überträgt es auf ein neues Röhrchen . Beschriften Sie diese Röhre "4." Fügen Sie 900 ul Normalpufferder U 4.
6

Entfernen Sie 10 ul BSA in Puffer von der U 1 und überträgt es auf ein neues Röhrchen . Beschriften Sie diese Röhre "5" Fügen Sie 990 ul Normalpufferder U- Rohre 5. 1- 5 bestehen aus einem abgestuften Standardreihe . Das erste Rohr weist eine bekannte Konzentration von 100 mg /ml; der zweite , 50 mg /ml; der dritte , 20 mg /ml , der vierte , 10 mg /ml; und die fünfte , 1 mg /ml. Jedes Röhrchen enthält etwa 1 ml Lösung.
Erstellen Antikörper Verdünnungen
7

In 5 0UL der gereinigte Antikörper bis 95 0UL Puffer . Beschriften Sie diese Röhre " A. "
8

In 10 ul gereinigte Antikörper bis 990 ul Puffer. Beschriften Sie diese Rohr "B"
9

In 2 ul gereinigte Antikörper zu 998 ul Puffer. Beschriften Sie diese Röhre " C "
Laden Sie die Platte
10

Zeigen 0,5 ml Klar Puffer in den ersten Brunnen in beiden Spalten der Multiwell-Platte .

11 <​​p> Zeigen 0,5 ml des Inhalts des Rohres 1 in die zweiten Bohrungen der ersten beiden Spalten in der Multiwell-Platte . Weiter auf der abgestuften Reihe , bis die ersten beiden Spalten enthalten 0,5 ml einer BSA -Standardlösung von jeder der Röhren 1-5 , einschließlich Brunnen für Normalpuffer .
12

0,5 ml Bradford Reagens in jede auch. Schwenken Sie die Platte , um das Reagenz mit den proteinhaltigen Lösungen zu mischen, man aufpassen, nicht um den Inhalt einer der Brunnen verschüttet . Warten Sie 5 Minuten.
13

Lesen Sie die Platte nach dem Protokoll speziell auf Ihre Plattenleser bei einer Wellenlänge von 595 nm ist.
Antikörper berechnen Konzentration

14

Kopieren Sie die Werte aus dem Plattenlesegerät in Microsoft Excel zu lesen.
15

erstellen Sie eine Grafik aus den beiden Spalten der Werte, die die BSA -Standard mit dem Diagramm-Assistenten in Microsoft Excel.

16

Zeichnen Sie die von den Antikörperverdünnungen in der Excel- Diagramm gemessen Punkten. Lesen Sie die entsprechende Konzentration des Proteins nach dem Wert der y - Achse für die Antikörperverdünnung Punkt auf der Excel- Diagramm .
17

Je nachdem, ob Sie die von der U- A, B erhaltenen Werte sind oder C , multiplizieren Sie den Wert von entweder 20 , 40 oder 500 sind. Der resultierende Wert ist die Konzentration des gereinigten Antikörpers .